دراسة کیموحیویة لأنزیم الفوسفاتیز القاعدی من بکتریا Staphylococcus aureus

سعت الدراسة الحالیة باستخدام التقنیات الحیاتیة المختلفة الى عـــــزل وتنقیة إنزیم الفوسفاتیز القاعــــدی Alkaline phosphatase من المستخلص البروتینی الخام (رائق الخلایا المتکسرة) من بکتیریا Staphylococcus aureus، وذلک حسب الخطوات المدرجة فی أدناه: الأولى: التحقق من وجود الانزیم فی البکتیریا، اذ تم تشخیص البکتیریا باستخدام شریـــــط API20 الذی یحتوی على (20) اختباراً، وتبین لدینا ان البکـتیریا المختبرة هی Staphylococcus aureus، وتم عزل الإنزیم للتأکد من وجوده فی هذه البکتیریا ضمن الطور اللوغارتمی وذلک بتنمیتها لمدة 18 ساعة فی الوسط الغذائی المناسب، وتبین انه من النوع الداخل خلویاﹰ بدلالة وجود فعالیة للإنزیم فی رائق الخلایا المتکسرة دون وجودها فی الرائق الخالی من الخلایا البکتیریة. الثانیة: تنقیة الإنزیم، تمت عملیة تنقیة الإنزیم على ثلاث مراحل هی: الترسیب بکبریتات الأمونیوم، ومن ثم الفرز الغشائی وأخیرا إمراره بعمود الفصل الکروماتوغرافی باستخدام هلام السیفادکس Sephadex G -100 حیث قـدرت الفعالیة النوعیة بعد عملیة التنقیة الأخیرة بحوالی 16.2 مرة بالمقارنة مع فعالیته قبل التنقیة (فی المستخلص البروتینی الخام). کما تم باستخدام تقنیة الترشیح الهلامی تعیین الوزن الجزیئی التقریبی لإنزیم الفوسفاتیز القاعدی الذی قدر بـ (51,000) دالتون. الثالثة: قیاس فعالیة الإنزیم فی الحیوانات المختبریة، أظهرت النتائج وجود زیادة ملحوظة فی فعالیة الإنزیم فی مصل دم الفئران المحقونة بالبکتیریا المرضیة مقارنة بفعالیته فی مصل دم الفئران السلیمة (غیر المحقونة